真空冷冻干燥机：助力猪血中提取抗菌肽

真空冷冻干燥机：助力猪血中提取抗菌肽

  由于真空冷冻干燥机具有其它干燥方法*的优点，因此真空冷冻干燥机一直以来越来越受到人们的青睐，在医药、生物制品和食品、化工方面的应用已日益广泛。

  利用真空冷冻干燥机从猪血中提取抗菌肽，属于天然提取物，具有天然、无毒、无污染、无残留、*、抗菌等特点，是一种新型的绿色抗微生物药物。

  利用真空冷冻干燥机从猪血中提取抗菌肽，它包括以下具体步骤:

  (1)猪血采集:从屠宰场采取新鲜猪血2-3L，使用5%柠檬酸钠抗凝；

  (2)萃取溶液:将新鲜猪血放置37℃温箱静置L_2h取上清，按照1:4的比例加入0.84%氯化铵溶液，混匀静置3min,常温400r/Min,离心10min,弃上清按比例加入氯化铵溶液混匀静置3min,再次500r/Min离心10min ;弃上清,使沉淀与少量冷的生理盐水，即4℃的生理盐水短时间混合，再用200ml冷的10%冰醋酸，即4℃的10%冰醋酸使沉淀悬浮，充分混匀，倒入50ml烧杯，超声波处理50次，然后溶液使用磁力搅拌器混匀搅动于4℃下萃取一夜；次日，将萃取的溶液取出15000r/Min离心30min，取上清4℃下保存，沉淀再次混悬于冷的10%醋酸中，充分混匀，混匀搅动于4℃下萃取一夜；第三天将萃取的溶液取出15000r/Min离心30min,zui后将溶液4℃下保存；

  (3)溶液除酸、浓缩、冻干:合并所保存的溶液，将溶液注入透析袋，扎紧袋口，然后将其放入烧杯，再向烧杯中倒入蒸馏水，蒸馏水液面要超过透析袋，4℃下透析除酸，每12h换水一次，直至透析袋外蒸馏水PH大于6，将透析袋放入瓷盘中，撒上聚乙二醇6000，透析浓缩约3-4h后即可将透析袋取出，将浓缩的溶液取出，放进真空冷冻干燥机内真空低温冻干，转移至青霉素小瓶中，密封-20℃保存；

  (4)抗菌肽的分离:将冻干样品用0.5%甲醇溶解，再上样于层析柱葡聚糖凝胶SephadexG25,同时打开柱的下端出口，注意控制流速为LmL/Min,5mL/管；用部分收集器收集洗脱液，5mL/管，收集的溶液用紫外分光光度计测其在280nm处的吸收值，将在280nm处有吸收的溶液分装于青霉素瓶中，再在真空冷冻干燥机中低温冻干，-80℃保存；取各瓶冻干保存的样品各20mg，分别溶于灭菌双蒸水中，无菌条件下用微孔滤膜过滤样品，将药敏纸片浸泡于过滤后的样品中，浸泡一个晚上后，用平皿纸片法初筛，收集具有抗菌活性的组分，置于5℃保存；

  (5)抗菌肽的纯化与浓缩:使用超滤装置进行超滤，膜包选用截流分子量为20kD。洗脱液选用0.5%甲醇溶液，滤出液既为所要获得的溶液。

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